Post by techspote on Jul 31, 2023 1:23:27 GMT -8
合物可识别靶序列中的原型间隔子相邻基序 (PAM) 元件和 20 个核苷酸的序列。然后 Cas 核酸酶在特定位点切割 dsDNA 或 ssRNA，以进行有效的基因组编辑 [ 47 ]。初步的成功促进了靶向和操作核酸新方法的开发，例如 Cas9 和 Cas13 直向同源物衍生的方法。9 ]。Cas9 系统可以同时靶向 dsDNA 和 ssRNA。化脓性链球菌的 Cas9 靶 RNA （RCas9）需要匹配的 gRNA 和互补的 PAM 呈递寡
核苷酸（PAMmer）[ 48 ]（图2C ①）。Cas9直向亚洲手机号码列表同源物（空肠弯曲杆菌和金黄色葡萄球菌的Cas9 ）可以在没有PAM的情况下切割ssRNA [ 49 ]（图2C ②）。Cas13 介导的系统仅靶向 RNA，其中 CRISPR RNA (crRNA) 引导 Cas13 切割特定的 RNA。Cas13a、Cas13b 和 Cas13d 已被证实可以在体外干扰和沉默哺乳动物细胞中的靶标 RNA。CasRx (RfxCas13d) 是
Cas13d 的一种亚型，在 HEK293T 细胞中表现出最有效的 RNA 敲低效率 [ 50 ]。可能需要原型间隔区侧翼序列（PFS）通过两个保守的高等真核生物和原核生物核苷酸结合（HEPN）靶标RNA分子[51] （图2C③ ）。Cas13d 是一种新的不依赖于 PFS 的 Cas，缺乏核酸内切酶活性的 Cas13b 的非催化变体可以通过与 ADAR2 脱氨酶结构